<<
>>

Влияние препаратов (Анандина, Фоспренила, напитка Скворцова №7) на репродукцию вируса Ньюкаслской болезни птиц в развивающихся куриных эмбрионах

Артемьева А.С., Грищук Л.Н.

Научный руководитель: Щербакова Т.Б., доцент кафедры микробиологии и вирусологии ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной

медицины», г. Троицк

Цель работы: изучить влияние препаратов на репродукцию вирусов.

Новизна исследования: ранее данные исследования в сравнительном аспекте на КЭ не проводились.

Материалы и методы исследования. В нашей работе мы использовали вирус болезни Ньюкасла вакцинный штамм Ла-Сота, естественно ослабленный. Этим вирусом мы заража­ли девятидневные куриные эмбрионы (КЭ), полученные из Челябинской птицефабрики, от кур, вакцинируемых от этой инфекции. Выводимость цыплят составляет - 70%. КЭ не обла­дает иммунной системой, поэтому можно выяснить, подавляется ли репродукция вируса вы­бранными препаратами.

Анандин - синтетический препарат, который стимулирует выработку интерферона, цитокинов, размножение клеток иммунной системы без прямого действия на вирусы.

Фоспренил - натуральный препарат, обладающий иммуностимулирующим дейст­вием на клетки иммунной системы и клетки - мишени, повышая их устойчивость к вирусам. Обладает прямым противовирусным действием на вирус чумы плотоядных, принадлежащий к тому же семейству, что и взятый нами в опыт.

Напиток №7 - натуральный препарат, включающий экстракты лекарственных трав и прополисную суспензию, обладающий иммуностимулирующим действием. Он был взят для выяснения наличия противовирусного действия.

В день заражения мы проводили овоскопию и отбирали живые КЭ (активно двигаю­щихся). Простым карандашом отмечали границу воздушной камеры, расположение плода и крупных сосудов. Работу с КЭ проводили в боксе стерильных условиях. Перед заражением дважды производили дезинфекцию скорлупы йодированным спиртом с последующим обжи­ганием факелом в области воздушной камеры.

Для заражения использовали вируссодержащую суспензию: флакон с вирусом разве­ли в 10 мл физраствора. Провели титрование разведенной вирусной суспензии в РГА. Реак­ция гемагглютинации (РГА) - заключается в способности вирусов агглютинировать эритро­циты. Готовили двукратные разведения вирусной суспензии и к каждому добавляли равный объем 1% взвеси эритроцитов кур. По последнему разведению, в котором наблюдалась агг­лютинация, считали титр вируса в 1 мл. Титр вируса составил 320 ГАЕ/мл.

Дозу вируса определили таким образом, чтобы преодолеть трансовариальный имму­нитет.

Для определения наличия антител в организме КЭ мы исследовали аллантоисную и амниотическую жидкость не зараженного КЭ в РГА на способность к нейтрализации данно­го вируса. Для этого взяли 0,5 мл вируса в титре 320 ГАЕ /мл и смешали с равным объемом аллантоисной жидкости и отдельно с амниотической жидкостью. Выдержали в термостате 30 мин для взаимодействия антител с антигеном. И снова определили титр в смеси.

Титр вируса 320 ГАЕ\мл за счет антител аллантоисной жидкости снизился в 2 раза, а за счет антител амниотической жидкости в 16 раз.

Таким образом, выбранный титр позволяет размножить вирус в аллантоисной полос­ти без его нейтрализации.

Заражение КЭ проводили закрытым способом в аллантоисную полость, так как за­ражение в амниотическую полость закрытым способом травматично, а при заражении от­крытым способом возможно загрязнение бактериальной микрофлорой.

КЭ устанавливаем тупым концом вверх. Отступив от края воздушной камеры 5-6 мм к центру, в скорлупе пробиваем отверстие со стороны противоположной эмбриону. В это от­верстие вертикально вводим иглу шприца с вируссодержащим материалом на глубину 10-12 мм и производим заражение. Отверстие в скорлупе заливаем стерильным парафином.

Схема опыта. В опыт было взято 16 КЭ:

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл анандина за 15 минут до заражения вирусом;

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл анандина в смеси с 0,1 мл вирусной суспензии;

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл фоспренила за 15 минут до заражения вирусом;

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл фоспренила в смеси с 0,1 мл вирусной суспензии;

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл напитка Скворцова №7 за 15 минут до заражения 0,1 мл ви­руса;

в 2 КЭ вводили по 0,2 мл напитка Скворцова №7 в смеси с 0,1 мл вирусной суспензии;

в 2 КЭ вводили только вирусную суспензию (контроль заражения);

2 КЭ не заражали вирусом (контроль).

После заражения КЭ поместили в инкубатор и проводили ежедневно наблюдения в течение 6 дней на наличие подвижности.

Неподвижные (погибшие) эмбрионы сразу помещали в холодильник. Живые КЭ ин­кубировали до наибольшего накопления вируса (6 день исследования) и тоже помещали в холодильник. На следующий проводили вскрытие КЭ, извлекали содержимое в чашки Петри и производили осмотр.

От всех КЭ были взяты пробы аллантоисной жидкости, в которых сначала определили наличие вируса в капельной РГА на предметном стекле, затем в пробах, где был обнаружен вирус, определили его титр в РГА на планшетах.

Результаты исследования и обсуждение.

Из данных таблицы видно, что при введении анандина до заражения оба КЭ и один КЭ, зараженный смесью фоспренила с вирусом, погибли через сутки. Из КЭ, которым вво­дили фоспренил до заражения, один погиб через 2 суток. У всех КЭ наблюдались одинако­вые патоморфологические изменения: гиперемия кожи, кровоизлияния в аллантоисной и ам­ниотической полостях, в стенке желточного мешка.

_ - погибший куриный эмбрион.


По нашему мнению, такие эмбрионы не выдержали воздействия препаратов, которые превышали дозу в 10 раз (лечебная доза анандина - 0,2 мл/кг, фоспренила - 0,1 мл/кг). Анандин не токсичен, но противопоказан с нарушенной функцией почек, вызывает раздражение тканей при внутримышечном введении. Фоспренил также не токсичен, но вызывает учаще­ние пульса, повышение температуры на 0,5 градусов, снижение реакции на раздражители в течение 1-2 суток, повышение артериального давления. Данные дозы препаратов оказались токсичными для КЭ, поступивших на исследование с патологией печени. Так как после вскрытия 18 не зараженных КЭ, у 9 было обнаружены изменения в печени (печень частично или полностью песочного цвета).

Один КЭ, зараженный смесью вируса с напитком №7, погиб на 6 день. В нем были обнаружены кровоизлияния на хорион-аллантоисной оболочке (ХАО), небольшое отставание в росте. Гибель КЭ с токсическим действием препарата не связана, так как он ранее прове­рялся другими исследователями на токсичность на культуре клеток.

Загрязнение бактериальной микрофлорой отсутствовало, так как при посеве на пита­тельные среды аллантоисной жидкости погибших КЭ, рост бактерий не наблюдался.

Механических повреждений при заражении КЭ не было, так как при вскрытии кури­ных эмбрионов их не обнаружили.

На вскрытии выживших КЭ было установлено следующее: контрольные КЭ, зара­женные вирусом, отличались от не зараженных отставанием в росте и наличием малочис­ленных кровоизлияний на ХАО, изменений в печени не было, у одного КЭ обнаружено большое количество хлопьев фибрина в аллантоисной жидкости.

У всех КЭ, зараженных смесью вируса с препаратами и с введенными препаратами до заражения, наблюдалась одинаковая картина вскрытия: малочисленные кровоизлияния на ХАО, стенках желточного мешка; патологии печени, нарушений в росте и развитии не было.

Только у КЭ, зараженного смесью фоспренила с вирусом, врожденная патология (2 клюва).

Контрольные зараженные куриные эмбрионы отличаются от испытуемых наличием большого количества хлопьев фибрина в аллантоисной полости.

Из погибших КЭ вирус был обнаружен только в КЭ, зараженном смесью вируса с на­питком №7, а живые КЭ все содержали вирус.

Это доказывает, что вирус размножается в присутствии всех исследуемых препаратов.

Из полученных данных видно, что титр вируса в зараженных куриных эмбрионах с анандином превышает контроль заражения в 24 раза, с фоспренилом - в 64 раза, с напитком №7 - в 168 раза.

По проделанной работе можно сделать следующие выводы:

Все изученные препараты не обладают противовирусным действием, а наоборот при­
водят к ускорению репродукции вируса в КЭ. На первом месте по стимуляции напиток №7; на втором - фоспренил; на третьем - анандин. Это говорит о том, что чем натуральнее пре­парат, тем более стимулирующим эффектом на репродукцию вирусов он обладает.

Фоспренил, имеющий противовирусное действие в отношении парамиксовирусов, сильнее стимулирует репродукцию вируса, чем анандин, который не обладает противови­русным действием.

Таблица 2 - Титр вакцинного штамма вируса ньюкаслской болезни птиц в зараженных куриных эмбрионах.

КЭ/ титр (ГАЕ/мл) в 1 КЭ во 2 КЭ средний титр
анандин до заражения
анандин + вирус 320 640 480
фоспренил до зараже­ния 1280 _ 1280
фоспренил +вирус 1280 1280
напиток до заражения 640 5120 2880
напиток + вирус 2560 5120 (погиб) 3840
Контроль заражения 20 20 20
Контроль


То, что КЭ остались жизнеспособными при таких титрах, указывает на способность исследуемых препаратов адаптировать клетки КЭ к репродукции вируса.

Данный вирус репродуцируется в цитоплазме и выходит из нее почкованием, при этом клетка не погибает, остается жизнеспособной до своей естественной гибели или до ис­тощения ресурсов. Такая интенсивная репродукция вируса без гибели клетки указывает на мощный стимулирующий эффект препаратов на ускоренные метаболические процессы в клетке. Организм КЭ успевает восстановить свои структуры при нарушении (например, по­вреждение сосудов ХАО) или эти нарушения не являются значимыми для жизнедеятельно­сти КЭ.

Превышенные дозы препаратов фоспренила и анандина в 10 раз оказались токсичны­ми для КЭ с патологией печени, особенно анандин, введенный в КЭ до заражения вирусом.

<< | >>
Источник: По материалам международных студенческих научно-практических конференций. Инновации студентов в области ветеринарной медицины биологии, экологии и зоотехнии. Современные проблемы товароведения, товарный консалтинг и экспертиза товаров.. 2010

Еще по теме Влияние препаратов (Анандина, Фоспренила, напитка Скворцова №7) на репродукцию вируса Ньюкаслской болезни птиц в развивающихся куриных эмбрионах:

  1. Влияние ковилона на организм птиц, привитых против ньюкаслской болезни.
  2. Влияние Escherichia coli u Sallmonella pullorum - gallinarum на антителообразвание у цыплят, вакцинированных против ньюкаслской болезни
  3. Особенности питания диких куринных птиц в связи с гельминтозами
  4. Ньюкаслская болезнь
  5. ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА ФОСПРЕНИЛ ПРИ ПОДОСТРОЙ ФОРМЕ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЙ КОШЕК
  6. Ньюкаслская болезнь
  7. Влияние медикаментозных препаратов на функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов на фоне описторхозной инвазии и болезни Лайма
  8. Влияние антиаритмических препаратов на поздние потенциалы
  9. БОЛЕЗНИ ПТИЦ И ИХ ПРОФИЛАКТИКА
  10. Влияние препаратов для анестезии на роженицу, плод и новорожденного
  11. Влияние препаратов на проводящую систему сердца
  12. Влияние лекарственных препаратов на нормальное и аномальное функционирование синусового узла
  13. Влияние пробиотического препарата велес 6.59 на организм поросят при профилактическом применении
  14. БОЛЕЗНИ ПТИЦ
  15. БОЛЕЗНИ ПТИЦ
  16. Влияние электролитного состава на эффективность сердечных гликозидов и других антиаритмических препаратов
  17. ОСНОВНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВОВИРУСНОГО ДЕЙСТВИЯ ФОСПРЕНИЛА: ПРИНЦИПЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ