Запись на прием к врачу

Рестрикция геномной ДНК

Для рестрикции геномной ДНК мы использовали два типа эндонуклеаз рестрикции (далее рестриктазы - табл.1). На первом этапе определенное количество ДНК из нормальной и опухолевой тканей инкубировали с рестриктазой, не содержащей в составе своего сайта рестрикции CpG динуклеотиды.
Затем отбирали половину или одну треть обработанной таким образом ДНК и добавляли к ней рестриктазу, чувствительную к статусу метилирования CpG динуклеотидов в составе своего сайта рестрикции. В дальнейшем аликвоту рестрицированной ДНК использовали в реакции амплификации. Все рестриктазы использовали с 5 кратным избытком (1 мкг ДНК - 5 ед. фермента) и инкубировали с ДНК в течение 14-16 ч. В случае метилчувствительных рестриктаз обработку проводили в два этапа, с добавлением на втором этапе половины первоначального количества фермента и инкубированием в течение 3-4 ч.
Онлайн консультация врача
<< | >>
Источник: Петренко А.А. Анализ метилирования днк при раке шейки матки. 2003

Еще по теме Рестрикция геномной ДНК:

  1. Генетические стратегии ДНК-геномных вирусов
  2. Механизмы возникновения геномных мутаций
  3. Разнообразие жизненных циклов РНК-геномных вирусов
  4. Геномные мутации
  5. Организация наследственного аппарата клеток человека (уровни организации: генный, хромосомный, геномный)
  6. ДНК–зонди
  7. Репликация ДНК
  8. Бисульфитная модификация ДНК
  9. Вирусная ДНК
  10. Переосаждение ДНК (РНК)
  11. Функция метилирования ДНК
  12. Технологія рекомбінантних ДНК
  13. Распространение метилирования ДНК
  14. Эпигенетическая роль метилирования ДНК в канцерогенезе
  15. Выделение ДНК из лейкоцитов
  16. Генетический компонент вируса – РНК или ДНК